CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班2019（12月北京班）已截止报名
推荐参加：2025第十三届国际基因节

会议时间： 2019-12-21 09:00至 2019-12-22 17:00结束

会议地点：北京北京理工大学国际教育交流中心北京理工大学国际教育交流中心（海淀区北三环西路66号）周边酒店预订

会议规模：50人

主办单位：北京微旋基因技术有限公司

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会议通知
会议内容主办方介绍

CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班2019（12月北京班）宣传图

CRISPR是继RNA干扰技术、高通量测序技术等之后生物科学发展历史上最具颠覆性技术之一，使用高效、迅速且简单，在生物医学研究领域引起一场巨变，并因此成为生物医学实验室常规技术。随着CRISPR基因治疗临床实验的初步成功，以及2018年的基因编辑婴儿事件预热，CRISPR技术被越来越多的研究人员用来改造人类基因以消除疾病，创造生命力更加顽强的植物，消灭病原体等。在过去的7年中CRISPR技术斩获了生命科学领域各种重量级奖项，包括生命科学突破奖，盖尔德纳国际奖等，《Science》年度突破、《Nature》年度人物均授予了CRISPR单碱基基因编辑技术的突破，2019年9月，北京大学邓宏魁组完成世界首例基因编辑治疗艾滋病和白血病，使CRISPR技术再一次成为生命科学的焦点。

随着近几年的发展，研究者开发出越来越多基于CRISPR的新型基因编辑技术，例如CRISPR转录激活/抑制技术，基因定位，表观遗传修饰，单碱基基因编辑系统（BE2，BE3，ABE等），CRISPR基因突变检测系统（Sherlock、DETECTR），无修复模板基因敲入技术等。CRISPR/Cas9系统的应用更加便捷、高效，也更广泛，目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌等基因组精确修饰，成为科研人员的强大工具，基于CRISPR临床实验已经取得初步成功。

为了让更多的科研人员及时全面的掌握CRISPR最新技术，并应用的相应的领域研究中。特于2019年12月21日至22日在北京理工大学国际教育交流中心举办CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班。在带教教师的指导下，学员独立完成一系列全部实验，免费获得一份CRISPR/Cas9敲除质粒载体（可以用于哺乳动物、植物、真菌、细菌、斑马鱼、线虫等，共60种）。免费赠送sgRNA离线设计软件（有基因组DNA序列即可设计！）

举办地点：

北京理工大学国际教育交流中心（海淀区北三环西路66号）

参加对象

从事医学、生命科学、农学等领域科研工作者和高校教师及研究生。

授课方式

1.理论讲授。

2.每位学员在辅导教师的指导下，独立完成实验操作。（可选）

CRISPR 质粒清单

Plant	#50588	pHSN401	CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; expresses 3×FLAG-NLS-zCas9-NLS, gRNA scaffold for insertion of target sequence (AtU6-26 promoter), Hyg resistance
	#63142	pRGEB32	(Empty Backbone) Express sgRNA/PTG with rice snoRNA U3 promoter and Cas9 with rice ubiquitin promoter for Agrobacterium-mediated transformation.
	#51295	pRGEB31	(Empty Backbone) Binary vector derived from pRGE31. Deliver sgRNA and Cas9 into plant. by agrobacterium mediated transformation.
Insect	#49330	pAc-sgRNA-Cas9	Expresses sgRNA and Cas9-Puro in Drosophila S2 cells
C.elegans	#47549	pDD162	Cas9 + sgRNA plasmid that can be modified to cleave any Cas9 target site in the C. elegans genome.
Yeast	#43804	p415	Human Optimized S. pyogenes Cas9
Bateria	#42875	pCRISPR	A crRNA expression plasmid for targeting a specific sequence
	#84379	pRH2502	Expression of dcas9 D10A H840A from a TetR-regulated uvtetO promoter
	#84380	pRH2521	Expression of sgRNA from a imyc promoter (Pimyc)
	#61737	pCRISPomyces-2	Streptomyces expression of codon-optimized Cas9 and custom gRNA
	#42876	pCas9	Bacterial expression of Cas9 nuclease, tracrRNA and crRNA guide
Zebrafish	#47929	pCS2-nCas9n	expression of an optimized Cas9 for genome-editing in zebrafish
Mammalian	#52970	FokI-dCas9	Expresses Fok1 nuclease domain fused to catalytically inactive Cas9 DNA-binding domain in mammalian cells
	#61591	PX601	A single vector AAV-Cas9 system containing Cas9 from Staphylococcus aureus (SaCas9) and its sgRNA.
	#42229	PX260	This plasmid separately encodes a human codon-optimized SpCas9, a tracrRNA and customizable crRNA.
	#42230	PX330	A human codon-optimized SpCas9 and chimeric guide RNA expression plasmid.
	#48138	PX458[GFP]	Cas9 from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA
	#48139	PX459[Puromycin]	Cas9 from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA (V2.0)
	#48140	PX461	Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA
	#48141	PX462[Cas9n,Puromycin]	Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA
	#50661	pCW-Cas9[Tet-on,Puromycin]	Inducible lentiviral expression of SpCas9
	#52963	LentiGuide-puro-Vector	Expresses S. pyogenes CRISPR chimeric RNA element with customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter. Lentiviral backbone.
	#52962	lentiCas9-Blast	Expresses human codon-optimized S. pyogenes Cas9 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. 3rd generation lentiviral backbone.
	#69982	pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1)	Expresses humanized AsCpf1
	#19319	pLJM1-EGFP	(Empty Backbone) 3rd gen lentiviral vector for EGFP fusion; PGK driven puromycin
	#12259	pMD2.G	VSV-G envelope expressing plasmid
	#12260	psPAX2	Lentivirus package plasmids
	#61427	lenti sgRNA(MS2)_zeo backbone	(Empty Backbone) 3rd generation lenti sgRNA cloning backbone with MS2 loops at tetraloop and stemloop 2 and EF1a-zeo resistance marker. Contains BsmBI sites for insertion of spacer sequences.
	#61426	lenti MS2-P65-HSF1_Hygro	lenti vector encoding the MS2-P65-HSF1 activator helper complex with a 2A Hygro resistance marker (EF1a-MS2-p65-HSF1-2A-Hygro-WPRE)
	#61425	lenti dCAS-VP64_Blast	3rd generation lenti vector encoding dCAS9-VP64 with 2A Blast resistance marker (EF1a-NLS-dCas9(N863)-VP64-2A-Blast-WPRE)
	#71814	eSpCas9(1.1)	Expresses high specificity SpCas9. Px330-like plasmid.
	#47327	pET-28b-Cas9-His	For in vitro expression and purification of Cas9 protein
	#62934	pET-NLS-Cas9-6xHis	Expression of NLS-Cas9-6xHis in bacterial cells
	86840	pJH373	mamalian expression of AcrIIA2
	84750	Lenti-AsCpf1-Blast	Expresses human codon-optimized AsCpf1 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. Lentiviral backbone.
	84752	Lenti_gRNA-Puro	(Empty Backbone) Expresses Cpf1 customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter
	79145	pCAG-eCas9-GFP-U6-gRNA	All-in-one CRISPR/Cas9 vector with high-fidelity eSpCas9 expression in human pluripotent stem cells
	84745	pY30	Expresses huAsCpf1-P2A-puro and crRNA guide
	84743	pY094	Expresses huAsCpf1-T2A-GFP and crRNA guide
	84741	pY026	Expresses huAsCpf1 and crRNA guide
	60958	PX552	pAAV-U6sgRNA(SapI)_hSyn-GFP-KASH-bGH (SpGuide acceptor). AAV plasmid for sgRNA cloning. GFP-KASH fusion facilitates FACS sorting of cells and nuclei.
	79152	pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning	LshC2c2 locus in pACYC184 with BsaI sites for spacer cloning
	79150	pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression	Expresses human codon-optimized LshC2c2 for purification in E. coli
	64324	pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mCherry	Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to mCherry via a T2A peptide
	64222	pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mcherry-P2A-Ad4E4orf6	Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked via T2A to mCherry linked to the Ad4 E4orf6 gene via P2A
	64218	pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP-P2A-Ad4E1B	Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked to BFP via T2A linked to Ad4 E1B via P2A
	64323	pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP	Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to BFP via a T2A peptide
	51023	pSLQ1658-dCas9-EGFP	Template for NLS-dCas9-NLS-EGFP fusion protein for CRISPR imaging (the recipient vector can be TetON 3G promoter system)
	64108	pHAGE-TO-dCas9-3XmCherry	Expression of Sp dCas9-3XmCherry in mammalian cells
	60957	PX551	pAAV-pMecp2-SpCas9-spA (AAV-SpCas9). AAV plasmid expressing Cas9 in neurons under control of truncated mecp2 promoter.
	100806	BE4-Gam	Expresses BE4-Gam in mammalian cells
	100809	SaBE4-Gam	Expresses SaBE4-Gam in mammalian cells
	102917	pCMV-ABE7.8	expresses ABE7.8 in mammalian cells
	102919	pCMV-ABE7.10	expresses ABE7.10 in mammalian cells
	108382	xCas9(3.7)-ABE(7.10)	Mammalian expression vector for xCas9(3.7)-ABE

北京微旋基因技术有限公司

公司主营业务为通过基因检测、质谱检测、生物信息分析等手段，为医疗机构、科研机构、企事业单位等提供基因组学类的检测和研究服务。微旋基因秉承“基因科技造福人类”的愿景，以推动生命科学研究进展、生命大数据应用和提高全球医疗健康水平为出发点，基于基因领域研究成果及精准检测技术在民生健康方面的应用，致力于加速科技创新，减少出生缺陷，加强肿瘤防控，抑制重大疾病对人类的危害，实现精准治愈感染，全面助力精准医学。公司主要服务于国内外的科研院校、研究所、独立医学检验实验室、制药公司等机构，以及国内外的各级医院、体检机构等医疗卫生机构、公司客户和大众客户。目前，公司业务已经覆盖了上百家医疗机构，其中三甲医院30多家一直与我们保持着量好的业务和科研合作，与各个地区合作的海内外医疗和科研机构超过100家。公司致力于基因技术的临床应用，细胞治疗和药物研发，汇聚了来自国内外医学、分子生物学、基因组学、生物信息学、计算机科学等各个领域的专业技术人才。

会议日程（最终日程以会议现场为准）

课程安排：

日期	时间	培训内容
12月20日	10:00-18:00	培训报到
12月21日	9:00-11:30	理论讲解：一、基因编辑技术简介（三代基因编辑工具） 1. ZFN 2.TALEN 3.CRISPR 二、CRISPR/Cas9基因编辑技术原理 1. CRISPR/Cas9发现历史 2. CRISPR/Cas9作用机制解析 3. CRISPR/Cas9系统改造策略
12月21日	13:00-17:00	理论讲解：一、sgRNA在线设计构建实战演练(1.靶基因序列查找2.sgRNA在线设计合成) 二、CRISPR/Cas9转染策略: 1.生物转染（慢病毒、腺相关病毒等） 2.物理转染（电转核酸/RNP、显微注射、基因枪） 3.化学转染（脂质体、阳离子聚合物）三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率检测，脱靶检测及解决策略 1、高保真Cas9（espCas9、Hifi-Cas9、Cluster1-Cas9）
12月22日	9:00-11:30	理论讲解：一、CRISPR技术应用解析 1.基因敲除（单基因敲除、多基因敲除、大片段删除、多靶点sgRNA载体构建策略） 2.基因敲入实战演练（gRNA选择、同源臂设计、导入，长片段导入策略/提高基因敲入效率策略，PITCh、HITI、CRISPR-转座酶高效基因敲入系统） 3.CRISPR在转录调控中的应用（转录激活、转录抑制系统） 4.CRISPR靶基因标记定位二、CRISPR案例解析 1.基因敲除在小鼠模型构建、植物、细胞、细菌、真菌等中的应用案例解析 2.基于CRISPR的全基因组基因敲除高通量筛选策略（文库构建，选择，流程优化等） 3.基于CRISPR的全基因组转录激活/抑制高通量筛选策略（文库构建，选择，流程优化等）三、CRISPR/Cas9与基因沉默技术（siRNA、shRNA）系统比较。
12月22日	13:00-17:00	理论讲解：一、单碱基基因编辑技术简介及在基因治疗中的应用 1.HF2-BE2 2.BE3系统 3.ABE系统4.单碱基基因编辑脱靶克服。二、基因CRISPR的基因检测系统 1、CRISPR-Cas12a系统介绍(DETECTR) 2、CRISPR-Cas13a系统介绍(SHERLOCK-多重病原菌检测) 三、CRISPR/Cas9系统在肿瘤和遗传病治疗中应用解析 1、CRISPR结合免疫检查点抑制剂治疗肿瘤 2、单基因遗传病治疗（DMD、先天性黑朦、地中海贫血等） 3、CRISPR治疗HIV-基因编辑婴儿解析 4、CRISPR治疗HIV炎性白血病病例解析四、新一代无模板基因敲入系统解析 1. 1、CRISPR Primer-editing 基因敲入原理及应用

日期	时间	培训内容
12月22日	18:00	实验操作：CRISPR/Cas9敲除质粒转染靶细胞
12月23日	9:00-11:30	实验操作：一、CRISPR/Cas9基因表达载体克隆构建1.sgRNA设计合成 2.敲除载体选择及线性化 3.sgRNA连接，转化等
12月23日	13:00-17:00	实验操作： 1.CRISPR/Cas9转染后靶DNA检测 2.靶基因修饰位点扩增及鉴定 3. CRISPR基因敲除效果检测

会议嘉宾（最终出席嘉宾以会议现场为准）

刘刚博士

2008年博士毕业于中国科学院上海生命科学研究院，从事肿瘤干细胞，细胞衰老，肿瘤转移等细胞作用网络和通路的研究，并作为骨干研究人员参加了973计划项目、国家自然科学基金重点项目、在香港中文大学做为作为Postdoc和Research fellow，从事研究工作。先后Nature Genetics，cell research、PLOS one等期刊发表论文十余篇。